Come scegliere una polimerasi di avviamento a caldo Taq/DNA

L'enzima di Taq di avviamento a caldo è ampiamente usato. Rispetto alla DNA polimerasi ordinaria, l'enzima di Taq di avviamento a caldo può efficacemente evitare una certa amplificazione non specifica e la formazione di dimeri dell'iniettore e può efficacemente migliorare l'indice di successo dell'amplificazione del gene dell'obiettivo. Particolarmente nel campo di prova genetica, l'enzima di Taq di avviamento a caldo è stato identificato come norma obbligatoria nell'industria e la DNA polimerasi ordinaria non dovrebbe essere usata. Così può essere visto dal di cui sopra, enzimi di Taq di avviamento a caldo sono ampiamente usato. Attualmente, ci sono molte marche di enzimi di Taq di avviamento a caldo sul mercato interno, ma ci non sono molti enzimi di Taq di avviamento a caldo con alta qualità. Affrontato a tanti prodotti degli enzimi di Taq di avviamento a caldo, come dovremmo scegliere?

1. Selezioni l'enzima di Taq di avviamento a caldo con alta efficienza di amplificazione

L'efficienza di amplificazione di PCR è strettamente connessa alla prestazione dell'enzima di Taq. Dopo buona reazione enzimica di Taq un sistema è ottimizzato, l'efficienza di amplificazione è superiore a 95% e la gamma di amplificazione dell'importo iniziale del modello è ampia. L'amplificazione soddisfacente può essere ottenuta quando il contenuto del gene dell'obiettivo è basso e non è facile da essere avvelenato quando l'importo del modello è alto ed il periodo esponenziale di amplificazione è lungo. Per l'enzima di Taq con il rendimento insufficiente, anche se il sistema di reazione è stato ottimizzato per molte volte, l'efficienza di amplificazione è ancora meno di 90%, la forma «di S» della curva di amplificazione non è ovvia, il pendio è piccolo e la curva è piana. Quando la quantità di modello è bassa, non può essere amplificata e quando la quantità elevata del modello è, l'effetto di amplificazione non è ideale. Di conseguenza, la selezione delle DNA polimerasi con alta efficienza di amplificazione è determinante per il successo della PCR e del qPCR.

2. Enzima scelto di Taq di avviamento a caldo con forte potere degli enzimi

Il potere enzimatico dell'enzima di Taq è collegato con l'efficienza di amplificazione. Generalità, più forte il potere enzimatico dell'enzima di Taq di avviamento a caldo, più lungo il periodo di crescita esponenziale di amplificazione di PCR, più tipica la curva “in forma di s”, più alto il valore del segnale di fluorescenza e il più adatto per rilevazione multipla di PCR. Le DNA polimerasi di marca con potere enzimatico debole possono sostenere generalmente soltanto le 2 reazioni del plex. Nel fare le 3 reazioni del plex, la curva di amplificazione è bassa, il valore del segnale della fluorescenza è basso e non c'è curva tipica di amplificazione, in modo dai risultati sono difficili da giudicare.

3. Selezioni un enzima di Taq di avviamento a caldo con l'alta sensibilità

In linea generale, la DNA polimerasi ha l'alta efficienza di amplificazione ed alta sensibilità, ma ci sono inoltre contraddizioni. Se l'abbondanza del gene dell'obiettivo del campione da amplificare è bassa, è raccomandato per verificare la sensibilità di amplificazione dell'enzima di Taq. Il metodo di rilevazione più comune è di effettuare la diluizione di 10 volte o di 5 volte di pendenza del frammento del plasmide del gene dell'obiettivo, effettua la rilevazione di PCR alla diluizione più bassa e seleziona l'enzima di Taq di avviamento a caldo con il più alta sensibilità di rilevazione.

Può essere visto dal di cui sopra che i ricercatori devono scegliere secondo i loro propri requisiti sperimentali e circostanze di finanziamento. È meglio da fare un esperimento di amplificazione di diluizione di pendenza per individuare l'efficienza di amplificazione e la sensibilità dell'enzima di Taq di avviamento a caldo.

Un esempio della DNA polimerasi del Taq di Foregene:

DNA polimerasi di Foreasy HS Taq

Descrizione

La DNA polimerasi di Foreasy il HS Taq è una DNA polimerasi espressa in Escherichia coli che costruisce i batteri dalla tecnologia di ricombinazione del gene. L'enzima si combina con un buffffer unico della reazione, che rende il prodotto altamente resistente e compatibile e può direttamente usare il lysate del campione (sistema di lisi di Foregene) come modello per le reazioni di rilevazione.

Applicazione

PCR qualitativa e rilevazione quantitativa di PCR dei modelli purifified e dei modelli non-purifified.

Controllo di qualità

1. Nessun'attività esogena della nucleasi ha individuato

Metodo 2.PCR per individuare DNA genomico residuo senza ospite

3.It può effffectively amplificare i geni della unico copia nel genoma umano

4.Store alla temperatura ambiente per una settimana, cambiamenti noobvious di attività