COME MIGLIORARE L'EFFICIENZA DELLA TRASCRIZIONE DI INVERSO DI LNCRNA?

Cavo

Il RNA lungo di non codifica, lncRNA è un RNA di non codifica con i maggiori di 200 nucleotidi di una lunghezza, generalmente fra il NT 200-100000. il lncRNA regola l'espressione genica ad epigenetico, trascrizione e livelli post-trascrizionali e partecipa al cromosoma X che fa tacere, genoma che imprime e la modifica della cromatina, l'attivazione della trascrizione, l'interferenza della trascrizione, il trasporto nucleare, il regolamento del ciclo cellulare, il regolamento di differenziazione cellulare e gli effetti della compensazione della dose (effetto della compensazione di dosaggio) e molti altri processi importanti di regolamento sono strettamente connessi all'avvenimento, allo sviluppo ed alla prevenzione delle malattie umane e sono attualmente uno dei punti caldi nel campo della biomedicina.

01 tipi e caratteristica di LncRNA

il lncRNA è diviso in molti tipi secondo le fonti differenti di sua formazione, secondo le indicazioni della figura qui sopra. Ha le seguenti caratteristiche:

1. i lncRNAs sono solitamente più lunghi, con l'espressione dinamica ed i metodi d'impionbatura differenti durante la differenziazione
2. rispetto a codificare i geni, il lncRNA ha solitamente un più basso livello di espressione
3. La maggior parte dei lncRNAs hanno specificità temporale e spaziale ovvia di espressione nel corso di differenziazione dei tessuti e dello sviluppo
4. Ci sono espressioni caratteristiche in tumori ed in altre malattie
5. Le posizioni sottocellulari di lncRNA sono diverse
6. La sequenza è bassa nella conservazione, ma la funzione ha un determinato grado di conservazione, ecc.

02 domande frequentemente fatte circa la trascrizione di inverso di LncRNA

dovuto il contenuto basso di lncRNA in cellule, lunghezza lunga e struttura ad alto livello, tale RNA ha spesso strutture complesse quali i cicli o le forcelle del gambo ed il RT-qPCR è a problemi inclini di trascrizione inversa infruttuosa o di basso rendimento.

Soluzione della trascrizione di inverso di 03 LncRNA

Nella regola centrale, il processo dei virus a RNA facendo uso della loro propria trascrittasi inversa per sintetizzare DNA facendo uso di RNA come un modello è chiamato trascrizione inversa. Il processo di usando la trascrittasi inversa del virus a RNA per sintetizzare il modello del cDNA in vitro è chiamato trascrizione inversa. Gli elementi principali hanno incluso nel sistema inverso della trascrizione: Modello del RNA, trascrittasi inversa, iniettori ed altre componenti.

Modello 1.RNA

L'influenza del modello del RNA su trascrizione inversa è riflessa nella sue struttura, purezza ed integrità. Più alte la purezza e l'integrità del RNA estratto, dell'più alta l'efficienza di trascrizione inversa e dell'più accurata i risultati quantitativi successivi. Il RNA purificato dai reagenti comunemente usati dell'estrazione del RNA contiene spesso i residui di sali della guanidina e dell'alcool, che hanno un forte effetto inibitorio sulla maggior parte della trascrittasi inversa.

transcrittasi 2.Reverse

La trascrittasi inversa ha un'influenza chiave nell'intero sistema inverso della trascrizione. La temperatura adatta per la trascrittasi inversa utilizzata nella maggior parte dei laboratori è generalmente 42°C. infatti, l'apertura della struttura ad alto livello del RNA richiede un'più alta temperatura ed i requisiti della trascrittasi inversa sono più alti.

3.Primer

Gli iniettori inversi della trascrizione includono gli iniettori gene-specifici, gli iniettori casuali e gli iniettori oligo di distacco. La maggior parte dei lncRNAs non contengono le code di polyA ed è importante abbinare correttamente gli iniettori casuali con il distacco oligo.

componenti 4.Other

Tenuto conto del fatto che il RNA è particolarmente facile da degradarsi, l'introduzione delle componenti nel sistema inverso della trascrizione può essere minimizzata, che può efficacemente impedire l'entrata di RNAsi ed assicurare il progresso regolare di trascrizione inversa.

Foregene si verifica dal modello del RNA, trascrizione inversa a qPCR completamente accompagna la vostra rilevazione del lncRNA

Corredo totale animale di isolamento del RNA (con la colonna di rimozione del gDNA)

Corredo totale di isolamento del RNA delle cellule (con la colonna di rimozione del gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (con il gDNase) (premiscela eccellente per la sintesi del cDNA del primo filo da lncRNA)

Verde in tempo reale I di PCR EasyTM-SYBR

Vantaggi dell'estrazione del RNA:

Il corredo usa la tecnologia di terza generazione dell'estrazione del RNA, nessuna necessità di usare la dnasi.

11 minuto dal piatto buono 96, 24, 12 e 6 le cellule di cultura, l'estrazione di alto-efficienza del RNA totale senza gDNA, di grande purezza, di alta qualità delle cellule.

Vantaggi della trascrizione inversa del lncRNA:

Un sistema inverso della trascrizione messo a punto specialmente affinchè LncRNA rimuovano rapidamente contaminazione di DNA genomico.

Il sistema inverso della trascrizione ha alta stabilità termica ed ancora ha buona prestazione inversa della trascrizione a 50°C.

I modelli con il contenuto elevato di GASCROMATOGRAFIA e la struttura secondaria complessa possono essere invertiti con alta efficienza.

Vantaggi di qPCR:

La polimerasi di Foregene Taq di avviamento a caldo ha il più alta efficienza di amplificazione, il più alta sensibilità di amplificazione e più alta specificità di amplificazione.

La miscela facile reale ottimizzata di PCR fa il verde che di SYBR ho più alta sensibilità di rilevazione e la sua intensità della fluorescenza è 3-5 volte che di simili prodotti, che possono soddisfare le esigenze dei tipi differenti di esperimenti quantitativi della fluorescenza.