Premiscela eccellente di Lnc-RT HeroTM I (con il gDNase) per la sintesi del cDNA del primo filo da lncRNA Cat.No.RTL-09098/09099

Lnc-RT HeroTM I (con il gDNase)

Premiscela eccellente per la sintesi del cDNA del primo filo da lncRNA

Cat.No.RTL-09098/09099

Descrizione:

Il Lnc-RT HeroTM I (con il gDNase) è un sistema inverso della trascrizione messo a punto specialmente affinchè il lncRNA rimuova rapidamente la contaminazione di DNA genomico. la miscela 5×gDNase può rimuovere rapidamente il genoma restante in RNA a 42°C per 2 minuti, efficacemente evitante l'interferenza del genoma sui risultati del qPCR.

La miscela di 5×L-RT HeroTM contiene la trascrittasi inversa di Foregene LncRNA sviluppata specialmente da Foregene, che è un nuovo tipo di trascrittasi inversa specificamente per lncRNA ed altri modelli complessi del RNA lungo, con più forte affinità del RNA ed efficienza di registrazione di più alta inversione. Il sistema ottimizzato fa il tasso inverso della trascrizione più velocemente e può trascrivere facilmente i modelli del RNA con il contenuto elevato di GASCROMATOGRAFIA e la struttura secondaria complessa. La prima sintesi del cDNA del filo può essere completata a 42°C in 15 minuti.

Specifiche:

25×20μl Rxns, 50×20μl Rxns

Componenti del corredo

Informazioni componenti dei corredi

Miscela di -5×gDNase: gDNA che rimuove l'agente, è necessario da usare il reagente conformemente alle istruzioni operative prima della reazione di RT è eseguito (il contenuto interno del glicerolo non può essere congelato e non può essere congelato, che appartiene ai fenomeni normali).

- MISCELA DI 5×L-RT HEROTM: Contiene la trascrittasi inversa di Foregene Lncrna, l'inibitore della RNAsi, DNTPS, Stabilifer, rinforzatore, ottimizzatore, (distacco) l'iniettore oligo 18).

Features&advantages:

- Capacità efficiente di rimuovere gDNA, che può rimuovere il gDNA nel modello in 2 minuti.

- Può invertire efficientemente la trascrizione di lncRNA. Quando il prodotto inverso della trascrizione è sottoposto a qPCR, il valore di Ct è più basso di quello del sistema inverso convenzionale della trascrizione.

- Sistema inverso efficiente della trascrizione, richiede soltanto 15 minuti per completare la sintesi del primo cDNA del filo.

- Modelli complessi: i modelli con il contenuto elevato di GASCROMATOGRAFIA e la struttura secondaria complessa possono anche essere invertiti con alta efficienza.

- il sistema inverso della trascrizione della Alto-sensibilità, di modelli livelli della pagina può anche ottenere il cDNA di alta qualità.

- Il sistema inverso della trascrizione ha alta stabilità termica, la temperatura ottimale della reazione è 42℃ ed ancora ha buona prestazione inversa della trascrizione a 50℃.

Requisiti del RNA del modello

È meglio da usare il RNA ha estratto dai campioni freschi o conservato a -80 °C.

- Integrità del modello: buona integrità, nessuna degradazione.

- Purezza del modello: Gli IONI, le proteine, gli ED, l'etanolo, i fenoli ed altre pubblicazioni contenuti in RNA colpiranno l'attività della trascrittasi inversa ed infine colpiranno gli effetti inversi della trascrizione.

Dosaggio del RNA del modello

- Per lncRNA: sistema totale del μl RNA/20 del μg 10ng-1.

- Per RNA generale: RNA del μg 0.1pg-1 o 0.01pg-0.1 sistema totale del μl del μg mRNA/20.

Informazioni componenti dei corredi

- miscela 5×gDNase: gDNA che rimuove l'agente, è necessario da usare il reagente conformemente alle istruzioni operative prima della reazione di RT è eseguito (il contenuto interno del glicerolo non può essere congelato e non può essere congelato, che appartiene ai fenomeni normali).

- MISCELA DI 5×L-RT HEROTM: Contiene la trascrittasi inversa di Foregene Lncrna, l'inibitore della RNAsi, DNTPS, Stabilifer, rinforzatore, ottimizzatore, (distacco_{) l'}iniettore oligo ₁₈).

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

- Il modello raccomanda di usando i campioni freschi o il RNA ha conservato nell'ambito -80 di ° C (RNA dovrebbe evitare il gelata-disgelo ripetuto, non assicurando l'integrità del RNA, degradazione).

- Per evitare l'inquinamento della RNASI, l'operazione sperimentale è effettuata nello spazio senza RNAsi; la testa della pistola e la centrifuga di PCR devono essere garantite per essere senza RNAsi; ed indossi i guanti eliminabili e le maschere.

- Prima di utilizzare, la MISCELA della miscela di GDNase di 5 × e 5 del × L-RT HEROTM è disposta su ghiaccio per farla completamente fusa e la pallottola leggera è mescolata; il sistema è formulato, prego funziona su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo, migliora la prestazione della specificità di amplificazione di PCR del corredo.

- 5 la MISCELA del × L-RT HEROTM ha aggiunto un iniettore inverso ottimizzato della trascrizione di rapporto senza aggiungere alcuni iniettori agli iniettori supplementari supplementari.

- Per il modello complesso del RNA della struttura secondaria, la temperatura della reazione può essere aumentata 50 a ° C

Flusso di lavoro:

Stoccaggio e durata di prodotto in magazzino:

I corredi eccellenti di PCR della premiscela dovrebbero essere immagazzinati a -20°C. immagazzinano il prodotto in un frigorifero della temperatura costante a -20°C subito dopo della ricevuta. Se le condizioni di stoccaggio sono appropriate, il prodotto non degraderà alcuna prestazione durante il periodo di un anno di validità.

Guida di analisi di problema

Seguire è un'analisi dei problemi che possono essere incontrati nell'uso dei corredi di serie di Lnc-RT HeroTM I (con il gDNase), sperante di essere utile ai vostri esperimenti. Inoltre, abbiamo dedicato il supporto tecnico per aiutare voi con l'altro sperimentale o i problemi tecnici oltre le istruzioni operative e le domande. Se avete qualunque bisogni, contattici prego: 028-83361257 o email: Tech@foregene.com.

Amplificazione non specifica

1. Progettazione irragionevole dell'iniettore

Raccomandazione: Iniettori di progettazione secondo i principi di progettazione dell'iniettore.

2. Residui del genoma.

Suggerimento: Assicuri che il primo punto della temperatura della reazione di rimozione del gDNA sia 42°C ed il tempo di reazione può anche essere esteso a 5min.

Nessun segnale di amplificazione dal RT-qPCR

1. Il RNA è degradato.

Raccomandazione: Il materiale per l'estrazione del RNA dovrebbe essere fresco come possibile ed il RNA di alta qualità e di grande purezza dovrebbe essere usato.

2. Il RNA contiene gli inibitori.

Raccomandazione: Gli inibitori inversi della trascrizione includono generalmente lo SDS, i sali della guanidina, gli ED, ecc. È raccomandato per lavare il precipitato del RNA con l'etanolo di 70% per rimuovere gli inibitori.

3. Edizioni di progettazione dell'iniettore.

Raccomandazione: Secondo il principio di progettazione dell'iniettore, riprogetti gli iniettori per ispezione.

La banda dell'obiettivo compare nel controllo in bianco

1. Contaminazione degli strumenti o dei reagenti di funzionamento.

Raccomandazione: Tutti i reagenti o attrezzature per l'esperimento dovrebbero essere sterilizzati nell'autoclave. Sia attento e delicato quando trattano per impedire i campioni del DNA il succhiamento nella pipetta o si è rovesciato dal tubo centrifugo.

2. La contaminazione si è presentata durante la preparazione del sistema di reazione di PCR.

Raccomandazione: Prenda le precauzioni necessarie quando trattano, come: guanti d'uso del lattice, facendo uso delle punte di filtro. Utilizzi la miscela in tempo reale di PCR in un sistema a prova di contaminazione.

3. Gli iniettori sono degradati.

Suggerimento: Usi l'elettroforesi di SDS-PAGE per individuare se gli iniettori sono degradati e sostituisca con i nuovi iniettori per gli esperimenti di rilevazione della fluorescenza.