RT-PCR EasyTM II Cat.No.RT in due tappe - i corredi matrici in due tappe di 02021/02022 di RT di PCR di PCR della miscela

RT-PCR EasyTM II Cat.No.RT (in due tappe) - i corredi matrici in due tappe di 02021/02022 di RT-PCR di PCR della miscela

RT-PCR EasyTM II (in due tappe)

Cat.No.RT - 02021/02022

Miscela matrice in due tappe di RT-PCR

RT-PCR EasyTM II (in due tappe)

Cat.No.RT - 02021/02022

Miscela matrice in due tappe di RT-PCR

Per uso di ricerca soltanto

Deposito a -20℃

Introduzione di prodotto

RT-PCR EasyTM II (in due tappe) contiene tutti i reagenti per RT-PCR in due tappe, combinando la reazione di RT e la reazione di PCR nello stesso corredo, fornendo la miscela ottimizzata di RT e la miscela di PCR. La miscela unica di RT può sintetizzare facilmente ed efficientemente il cDNA di alta qualità del primo filo. 2× il più della miscela di PCR EasyTM ha l'alto-efficienza ed amplificazione specifica. La combinazione organica dei due rende la rilevazione del gene dell'obiettivo più sensibile.

Caratteristiche

L'analisi quantitativa in tempo reale di RNA può essere effettuata rapidamente ed esattamente.

Il corredo usa un reagente della trascrizione dell'inverso di Foregene e una DNA polimerasi unici di Foregene HotStar Taq combinati con un sistema di reazione unico efficacemente per migliorare l'efficienza di amplificazione e la specificità della reazione.

Il sistema di reazione ottimizzato fa la reazione ha il più alta sensibilità di rilevazione, la più forte stabilità termica e migliore tolleranza.

Kit Contents

Trasporto e condizioni di stoccaggio

1. Condizioni di trasporto

L'intero processo del trasporto a bassa temperatura del contenitore di ghiaccio, assicurarsi che il corredo sia in uno stato di <4>

2. Condizioni di stoccaggio

Immagazzinato a -20°C. immagazzini il prodotto in un frigorifero della temperatura costante a -20°C subito dopo della ricevuta. Se le condizioni di stoccaggio sono appropriate, il prodotto non degraderà alcuna prestazione durante il periodo di un anno di validità.

Informazioni componenti del corredo

Miscela di 2× RT EasyTM: Trascrittasi inversa di Foregene, inibitore della RNAsi, dNTPs, amplificatore di reazione, ottimizzatore e stabilizzatore, ecc.

2× più della miscela di PCR EasyTM: DNA polimerasi di Foregene Taq, dNTPs, Mg2+, amplificatore di reazione, ottimizzatore e stabilizzatore.

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

I reagenti dovrebbero evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento, altrimenti la prestazione dei reagenti diminuirà o diventerà invalida.

Per i modelli, è raccomandato per usare il RNA estratto dai campioni freschi o immagazzinato a -80℃ (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

Per evitare la contaminazione della RNAsi, l'operazione di esperimento dovrebbe essere effettuata nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta e tubi centrifughi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed i guanti eliminabili e le maschere dovrebbero essere indossati.

Questo corredo deve essere usato con gli iniettori specifici per gli esperimenti. Selezioni prego gli iniettori specifici affinchè il gene siano amplificati secondo i bisogni dell'esperimento.

Prima dell'uso, miscela messa di 2×RT EasyTM e più della miscela di 2×PCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, al colpo di frusta ed alla miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e per migliorare la specificità dell'amplificazione di PCR.

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

- I reagenti dovrebbero evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento, altrimenti la prestazione dei reagenti diminuirà o diventerà invalida.

- Per i modelli, è raccomandato per usare il RNA estratto dai campioni freschi o immagazzinato a -80℃ (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

- Per evitare la contaminazione della RNAsi, l'operazione di esperimento dovrebbe essere effettuata nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta e tubi centrifughi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed i guanti eliminabili e le maschere dovrebbero essere indossati.

- Questo corredo deve essere usato con gli iniettori specifici per gli esperimenti. Selezioni prego gli iniettori specifici affinchè il gene siano amplificati secondo i bisogni dell'esperimento.

- Prima dell'uso, miscela messa di 2×RT EasyTM e più della miscela di 2×PCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, al colpo di frusta ed alla miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e per migliorare la specificità dell'amplificazione di PCR.

Concentrazione nel RNA del modello

RT-PCR EasyTM II (in due tappe): (sistema)/20μl del RNA di totale 0.1pg-5μg

Guida di operazione

A-1: Preparazione dei materiali e dei reagenti

1. Prepari il modello pronto del RNA (è raccomandato per usare i corredi di serie del corredo di isolamento del RNA di totale di Foregene per estrarre e purificare il RNA), iniettori specifici (10μM) e materiali di consumo e strumenti relativi.

Nota: Assicuri prego l'integrità di RNA e provi ad usare il RNA estratto dai campioni freschi.

2. La miscela messa di 2×RT EasyTM e ddH2O senza RNAsi su un bagno di ghiaccio per lasciarlo fondersi naturalmente e passano rapidamente la parete del tubo per mescolarsi bene per uso successivo.

A-2: Preparazione del sistema di RT

La miscela di 2× il RT EasyTM è conveniente e rapida da usare, evitando l'inquinamento durante il funzionamento e gli errori sperimentali causati tramite le preparazioni multiple del sistema di reazione nella massima misura possibile. Nel usando, appena prenda la metà del volume del sistema di reazione (per esempio, se il sistema di reazione è 20μl, soluzione della miscela della presa 10μl 2×RT EasyTM), aggiunga il modello del RNA e gli iniettori inversi della trascrizione ed aggiunga ddH2O senza RNAsi per comporre il volume a 20μl. La preparazione specifica del sistema di reazione di RT può riferirsi a per presentare 1 qui sotto.

Forma 1: Preparazione del sistema di RT

A-3: Regolazione di programma di reazione di RT

1. Dopo la preparazione del sistema di RT in riferimento alla tavola di cui sopra, miscela delicatamente (potete usare una punta della pipetta per soffiare delicatamente; potete anche mescolarlo sul vortexer e centrifugarlo per raccogliere il liquido sparso sulla parete del tubo o sul cappuccio del tubo e lo disponete in pronto per l'uso sul contenitore di ghiaccio).

2. Riferisca alle regolazioni di programma della reazione di RT (tabella 2) per mettere la temperatura di reazione, il tempo, ecc.

Nota: Per assicurare l'attività della miscela e per migliorare la sua efficienza di amplificazione, è meglio da preparare il sistema di reazione di RT dopo il bagno del metallo raggiunge la temperatura stabilita della reazione (temperatura inversa 42℃ o 50℃ della trascrizione), di modo che il sistema può essere preparato subito dopo del completamento della preparazione del sistema. Segua il programma della reazione. La reazione di RT può anche essere eseguita su una macchina di PCR.

Forma 2: Regolazione di programma di reazione di RT

Nota: Nel per mezzo dell'iniettore casuale, la reazione dovrebbe essere preriscaldata a 25℃ per 10min prima del primo punto della reazione. La procedura di cui sopra è per riferimento soltanto. Gli stati reali della reazione variano secondo i termini strutturali del modello, degli iniettori, ecc. Per i modelli del RNA con i risultati secondari complessi, la prima temperatura della reazione è raccomandata per essere 50℃.

1. Il prodotto della reazione può direttamente essere utilizzato nelle prove successive, o essere immagazzinato a -20°C per fino ad una settimana. Per deposito a lungo termine, è raccomandato per evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti a -80°C.

B: Reazione dell'identificazione di PCR

B-1: Preparazione del sistema di reazione di PCR

Usi il cDNA ha sintetizzato al punto A come modello ed eseguono la reazione di PCR con il più della miscela di 2×PCR EasyTM fornito nel corredo. Più della miscela del posto 2×PCR EasyTM, cDNA e ddH2O senza RNAsi su un bagno di ghiaccio per lasciarlo fondersi naturalmente e passare rapidamente la parete del tubo per mescolarsi fino ad uso. Per la preparazione specifica del sistema di PCR, riferisca alla tabella 3 qui sotto.

Forma 3: 反应体系配制 della preparazione del sistema di reazione di PCR

1*: La concentrazione finale di iniettore è solitamente 0.2-0.25μM per migliorare i risultati. Quando la prestazione della reazione è povera, la concentrazione nell'iniettore può essere regolato all'interno della gamma di 0.1-0.5μM.

B-2: Regolazione di stato di reazione di PCR

1. Dopo la preparazione del sistema di PCR in riferimento alla tavola di cui sopra, miscela delicatamente (potete usare una punta della pipetta per soffiare delicatamente; potete anche mescolarlo sul vortexer e centrifugarlo per raccogliere il liquido sparso sulla parete del tubo o sul cappuccio del tubo e lo disponete in pronto per l'uso sul contenitore di ghiaccio).

2. Riferisca alle regolazioni di programma della reazione di PCR (tabella 4) per fissare la temperatura ed il tempo della reazione.

Nota: Per assicurare l'attività della miscela di PCR e per migliorare la sua efficienza di amplificazione, è meglio da presentare i termini di PCR sulla macchina di PCR preparare il sistema di PCR.

Forma 4: Regolazione di stato di reazione di PCR

1*: Fissi un momento specifico secondo la lunghezza del frammento amplificato dell'obiettivo. La velocità di amplificazione della DNA polimerasi di Foregene Taq è 2kb/min.

Nota: Gli stati della reazione di PCR variano secondo i termini strutturali del modello, degli iniettori, ecc. Per i modelli del RNA con le strutture secondarie complesse, è raccomandato che la temperatura della reazione per il primo punto di trascrizione inversa sia 50°C. Nelle operazioni specifiche, è necessario da progettare i termini ottimali della reazione, compresi la temperatura, tempo di estensione, ecc. di tempera, secondo i termini specifici quali la dimensione del frammento dell'obiettivo, la sequenza bassa del frammento amplificato ed il contenuto di GASCROMATOGRAFIA e la lunghezza dell'iniettore.

Diagramma di operazione di RT-PCR