RT-QPCR EasyTM - verde I Cat.No.RT di SYBR - 02111/02112 una di miscela matrice di PCR di RT di tempo reale di punto con la tintura di riferimento di ROX

RT-qPCR EasyTM (un punto) - verde I Cat.No.RT di SYBR - 02111/02112 di miscela matrice in tempo reale una tappa di RT-PCR con la tintura di riferimento di ROX

RT-qPCR EasyTM (un punto) - verde I di SYBR

Cat.No.RT - 02111/02112

Miscela matrice in tempo reale una tappa di RT-PCR

Per uso di ricerca soltanto

Deposito a -20℃

Introduzione di prodotto

RT-qPCR EasyTM (un punto) - verde Iuses di SYBR un sistema unico efficacemente per combinare RT e le reazioni in tempo reale di PCR, che possono completare rapidamente la rilevazione quantitativa dei geni. Il prodotto ha la forte tolleranza, l'alta specificità e stabilità. Il prodotto contiene la DNA polimerasi unica del Foregene HotStar Taq della società, che presenta i vantaggi dell'amplificazione più veloce (2Kb/min), di alta efficienza di amplificazione, di forte abilità specifica di amplificazione e del tasso basso del disadattamento rispetto agli enzimi ordinari di Taq. È usato qui affinchè RT-PCR in tempo reale riduca l'amplificazione non specifica e per migliorare l'accuratezza della PCR.

Caratteristiche

Il corredo una tappa fa la trascrizione inversa e le reazioni del qPCR due nello stesso tubo, devono soltanto aggiungere il RNA del modello, gli iniettori specifici di PCR e ddH2O senza RNAsi.

Il corredo può analizzare rapidamente ed efficientemente quantitativamente RNA virale o il RNA della traccia.

Il corredo usa un reagente della trascrizione dell'inverso di Foregene e una DNA polimerasi unici di Foregene HotStar Taq combinati con un sistema di reazione unico efficacemente per migliorare l'efficienza di amplificazione e la specificità della reazione.

Il sistema di reazione ottimizzato fa la reazione ha il più alta sensibilità di rilevazione, la più forte stabilità termica e migliore tolleranza.

Il RT-qPCR EasyTM (un punto) - corredo di verde I di SYBR viene con la tintura interna di riferimento di ROX, che può essere usata per eliminare il fondo del segnale e gli errori del segnale fra i pozzi, che è conveniente affinchè i clienti utilizzi nei modelli differenti degli strumenti quantitativi di PCR.

Kit Contents

Trasporto e condizioni di stoccaggio

stati 1.Transportation

L'intero processo del trasporto a bassa temperatura del contenitore di ghiaccio, assicurarsi che il corredo sia in uno stato di <4>

2. Condizioni di stoccaggio

• Il corredo è immagazzinato a -20℃. Immagazzini il prodotto in un frigorifero della temperatura costante a -20℃ subito dopo della ricevuta. Se le condizioni di stoccaggio sono appropriate, il prodotto non degraderà alcuna prestazione durante il periodo di un anno di validità.
• la componente della miscela-SYBR di 2×RT-qPCR EasyTM contiene il verde I di SYBR, prego lo tiene a partire da luce.

Informazioni componenti del corredo

Miscela-SYBR di 2× RT-qPCR EasyTM: Trascrittasi inversa di Foregene, inibitore della RNAsi, DNA polimerasi di Foregene HotStar Taq, rapporto ottimizzato dei dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, stabilizzatori, rinforzatori ed ottimizzatori.

Tintura di riferimento di ROX: è usata generalmente sugli amplificatori in tempo reale di PCR delle società quali ABI e Stratagene per regolare la differenza fra i tubi di PCR ed i tubi causati dagli errori di caricamento del campione di PCR. La concentrazione di tintura di riferimento di ROX richiesta dagli strumenti differenti è differente e l'utente può aggiungerlo secondo la concentrazione raccomandata dello strumento.

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

I reagenti dovrebbero evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento, altrimenti la prestazione dei reagenti diminuirà o diventerà invalida.

I reagenti nel corredo dovrebbero essere protetti da luce ed essere immagazzinati a -20°C.

È raccomandato per usare l'estrazione del campione o il RNA fresca del modello immagazzinato a -80°C (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

Per evitare la contaminazione della RNAsi, esegua prego l'esperimento nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta ed i tubi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed indossi i guanti eliminabili e le maschere.

Questo corredo deve essere usato con gli iniettori specifici per gli esperimenti. Selezioni prego gli iniettori specifici affinchè il gene siano amplificati secondo i bisogni dell'esperimento.

Prima dell'uso, miscela-SYBR messa I di 2×RT-qPCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, colpo di frusta e miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e per aumentare l'amplificazione di PCR la specificità.

la miscela-SYBR di 2×RT-qPCR EasyTM contiene il verde I di SYBR, prego evita la forte luce.

Concentrazione nel RNA del modello

RT-qPCR EasyTM (un punto) - verde I di SYBR: (sistema)/20μl del RNA di totale 0.1pg-100ng.

Guida di operazione

: Preparazione dei materiali e dei reagenti

1. Prepari il modello pronto del RNA (è raccomandato per usare i corredi di serie del corredo di isolamento del RNA di totale di Foregene per estrarre e purificare il RNA), iniettori specifici (10μM) e materiali di consumo e strumenti relativi.

Nota: Assicuri prego l'integrità di RNA e provi ad usare il RNA estratto dai campioni freschi.

2. Miscela-SYBR messa di 2×RT-qPCR EasyTM, tintura senza RNAsi di riferimento ddH2O e 50×ROX (se necessario) su ghiaccio per lasciarlo fondersi naturalmente e passare rapidamente la parete del tubo per mescolarsi fino ad uso.

B: Preparazione del sistema RT-qPCR

La miscela-SYBR di 2× il RT-qPCR EasyTM è conveniente e rapida da usare ed evita l'inquinamento durante il funzionamento e gli errori sperimentali causati tramite le preparazioni multiple del sistema di reazione nella massima misura possibile. Nel usando, soltanto la metà del volume del sistema di reazione (per esempio, se il sistema di reazione è 20μl, soluzione della miscela-SYBR della presa 10μl 2×RT-qPCR EasyTM), aggiunge il modello del RNA e gli iniettori specifici ed aggiunge ddH2O senza RNAsi per comporre il volume. Riferisca alla tabella 1 qui sotto per la preparazione specifica del sistema di reazione RT-qPCR

Forma 1: Preparazione del sistema RT-qPCR

1*: La concentrazione finale di iniettore è solitamente 0.2-0.25μM per migliorare i risultati. Quando la prestazione della reazione è povera, la concentrazione nell'iniettore può essere regolato all'interno della gamma di 0.1-0.5μM.

Nota: L'iniettore di andata e l'iniettore inverso sono iniettori specifici per il gene dell'obiettivo.

2*: Scelga la concentrazione finale appropriata di tintura di riferimento di ROX secondo gli strumenti quantitativi differenti di PCR. La concentrazione ottimale di tintura di riferimento di ROX per le macchine quantitative comuni di PCR è indicata nella seguente tavola:

C: Regolazione del sistema di reazione RT-qPCR

• Dopo la preparazione del sistema RT-qPCR in riferimento alla tavola di cui sopra, miscela delicatamente (potete usare delicatamente una punta della pipetta alla pipetta; potete anche mescolarti su un vortexer e su una centrifuga brevemente per raccogliere il liquido sparso sulla parete del tubo o sul cappuccio del tubo e su un posto sul contenitore di ghiaccio per uso successivo).

2. Riferisca alle regolazioni di programma della reazione RT-qPCR (tabella 2) per fissare la temperatura ed il tempo della reazione.

Nota: Per assicurare l'attività della miscela-SYBR di 2×RT-qPCR EasyTM e per migliorare la sua efficienza di amplificazione, è meglio da preparare il sistema di reazione RT-qPCR dopo l'installazione del programma dello strumento di PCR, di modo che il programma della reazione può essere seguito subito dopo che la preparazione del sistema è completata.

3. Per ottenere il migliore effetto del qPCR, la PCR di pendenza può essere usata per ottimizzare i termini della reazione per i modelli differenti e gli iniettori differenti.

Nota: La gamma di temperature di estensione della DNA polimerasi di Foregene Hotstar Taq ha fornito in questo corredo è: 60-72℃ e la migliore temperatura di estensione è 72℃.

Seguire è un esempio degli stati della reazione RT-qPCR. È raccomandato per usare un metodo in due tappe per la reazione di PCR. Quando la concentrazione nel modello è troppo bassa per causare l'amplificazione non specifica, il valore basso del TM dell'iniettore conduce ad efficienza bassa di amplificazione o ripetibilità difficile della curva di amplificazione, ecc., è raccomandato per provare il metodo in tre tappe per la reazione di PCR. Riferisca alla tabella 2-1 (metodo in due tappe) ed alla tabella 2-2 (metodo in tre tappe) per la regolazione degli stati della reazione RT-qPCR.

Forma 2-1: Regolazione di programma di reazione RT-qPCR (in due tappe)

Forma 2-2: Regolazione di programma di reazione RT-qPCR (in tre tappe)

1*: Il tempo inverso della trascrizione può essere regolato secondo i bisogni sperimentali. I geni endogeni generali quale β-actina hanno bisogno soltanto di 10 minuti; per individuare i geni espressi specifici, il tempo inverso della trascrizione può essere giustamente esteso come stato necessario.

2*: Fissi un momento specifico secondo la lunghezza del frammento amplificato dell'obiettivo. La velocità di amplificazione della DNA polimerasi di Foregene HotStar Taq è 2kb/min.

Nota: Gli stati della reazione di PCR variano secondo i termini strutturali del modello, degli iniettori, ecc. Per i modelli del RNA con le strutture secondarie complesse, è raccomandato per usare 42℃ per il primo punto di trascrizione inversa. Nell'operazione specifica, è necessario da progettare gli stati ottimali della reazione secondo i termini specifici quali la dimensione del frammento dell'obiettivo, la sequenza bassa del frammento amplificato ed il contenuto di GASCROMATOGRAFIA e la lunghezza dell'iniettore, compreso la temperatura, il tempo di estensione, ecc. di tempera.

Diagramma di operazione

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

- I reagenti dovrebbero evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento, altrimenti la prestazione dei reagenti diminuirà o diventerà invalida.

- I reagenti nel corredo dovrebbero essere protetti da luce ed essere immagazzinati a -20°C.

- È raccomandato per usare l'estrazione del campione o il RNA fresca del modello immagazzinato a -80°C (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

- Per evitare la contaminazione della RNAsi, esegua prego l'esperimento nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta ed i tubi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed indossi i guanti eliminabili e le maschere.

- Questo corredo deve essere usato con gli iniettori specifici per gli esperimenti. Selezioni prego gli iniettori specifici affinchè il gene siano amplificati secondo i bisogni dell'esperimento.

- Prima dell'uso, miscela-SYBR messa I di 2×RT-qPCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, colpo di frusta e miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e per aumentare l'amplificazione di PCR la specificità.

- la miscela-SYBR di 2×RT-qPCR EasyTM contiene il verde I di SYBR, prego evita la forte luce.