RT-QPCR EasyTM (un punto) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 di miscela matrice in tempo reale una tappa di RT-PCR

Cat.No.RT - 02131/02132

Miscela matrice in tempo reale una tappa di RT-PCR

RT-PCR EasyTM I (un punto)

Cat.No.RT - 02011/02012

Miscela matrice una tappa di RT-PCR

Per uso di ricerca soltanto

Deposito a -20℃

Introduzione di prodotto

I prodotti una tappa di serie di Foregene RT-PCR EasyTM realizzano che la reazione integrata da RNA al DNA a doppia elica, cioè, inverte la trascrizione ed amplificazione di PCR è completata nello stesso tubo centrifugo della reazione e lo stesso sistema di reazione, che semplifica i punti sperimentali, ottimizza il programma sperimentale e migliora l'efficienza di esperimento.

RT-qPCR EasyTM (un punto) - Taqman facendo uso della DNA polimerasi di Foregene HotStar Taq, il sistema ottimizzato del qPCR di Taqman può rapidamente e specificamente realizzare rilevazione quantitativa in tempo reale RT-qPCR dei modelli del RNA della traccia.

Caratteristiche

- Il corredo una tappa permette alla trascrizione inversa e la PCR da effettuare nello stesso tubo, deve soltanto aggiungere il RNA del modello, gli iniettori specifici di PCR e ddH2O senza RNAsi.

- L'analisi quantitativa in tempo reale di RNA virale o del RNA della traccia può essere effettuata rapidamente ed esattamente.

- Il corredo usa un reagente della trascrizione dell'inverso di Foregene e una DNA polimerasi unici di Foregene HotStar Taq combinati con un sistema di reazione unico efficacemente per migliorare l'efficienza di amplificazione e la specificità della reazione.

- Il sistema di reazione ottimizzato fa la reazione ha il più alta sensibilità di rilevazione, la più forte stabilità termica e migliore tolleranza.

- Il RT-qPCR EasyTM (un punto) - corredo di Taqman viene con la tintura interna di riferimento di ROX, che può essere usata per eliminare il fondo del segnale e gli errori del segnale fra i pozzi, che è conveniente affinchè gli utilizzatori finali utilizzi nei modelli differenti degli strumenti quantitativi di PCR

Il controllo di qualità del prodotto

Secondo il sistema di qualità totale di FOREGEN (sistema di qualità totale di FOREGENE), ogni serie di corredi di RT-PCR EasyTM I (un punto) è provata rigorosamente periodi multipli assicurare la qualità, l'affidabilità e la stabilità di ogni lotto dei corredi.

Kit Contents

Trasporto e condizioni di stoccaggio

stati 1.Transportation

L'intero processo del trasporto a bassa temperatura del contenitore di ghiaccio, assicurarsi che il corredo sia in uno stato di <4>

2. Condizioni di stoccaggio

RT EasyTM sono immagazzinato a -20°C. immagazzino il prodotto in un frigorifero della temperatura costante a -20°C subito dopo della ricevuta. Se le condizioni di stoccaggio sono appropriate, il prodotto non degraderà alcuna prestazione durante il periodo di un anno di validità.

Informazioni componenti del corredo

Miscela di 2× RT-PCR EasyTM: Trascrittasi inversa di Foregene, inibitore della RNAsi, DNA polimerasi di Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, amplificatore di reazione, ottimizzatore e stabilizzatore, ecc.

Precauzioni: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

Per i modelli, è raccomandato per usare il RNA estratto dai campioni freschi o immagazzinato a -80℃ (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

Per evitare la contaminazione della RNAsi, l'operazione di esperimento dovrebbe essere effettuata nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta e tubi centrifughi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed i guanti eliminabili e le maschere dovrebbero essere indossati. Prima dell'uso, metta la miscela di 2×RT-PCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, al colpo di frusta ed alla miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e la specificità dell'amplificazione di PCR.

Concentrazione nel RNA del modello

RT-PCR EasyTM I (un punto): (sistema)/20μl del RNA di totale 0.1pg-1μg

Kit Application

- Questo corredo è usato per tempestiva rilevazione della alto-copia e dei geni della basso copia.

- È particolarmente adatto a tempestiva rilevazione dei modelli del RNA con l'alta struttura secondaria contenta o complessa di GASCROMATOGRAFIA.

Il controllo di qualità del prodotto

Secondo il sistema di qualità totale di FOREGEN (sistema di qualità totale di FOREGENE), ogni serie di corredi di RT-PCR EasyTM I (un punto) è provata rigorosamente periodi multipli assicurare la qualità, l'affidabilità e la stabilità di ogni lotto dei corredi.

Guida di operazione

: Preparazione dei materiali e dei reagenti

1. Prepari il modello pronto del RNA (è raccomandato per usare i corredi di serie del corredo di isolamento del RNA di totale di Foregene per estrarre e purificare il RNA), iniettori specifici (10μM) e materiali di consumo e strumenti relativi.

Nota: Assicuri prego l'integrità di RNA e provi ad usare il RNA estratto dai campioni freschi.

2. La miscela del posto 2× RT-PCR EasyTM e ddH2O senza RNAsi su un bagno di ghiaccio per lasciarlo fondersi naturalmente e passano rapidamente la parete del tubo per mescolarsi bene per uso successivo.

B: Preparazione del sistema di RT-PCR

La miscela di 2×RT-PCR EasyTM è conveniente e rapida da usare, evitando l'inquinamento durante il funzionamento e gli errori sperimentali causati tramite le preparazioni multiple del sistema di reazione nella massima misura possibile. Nel usando, soltanto la metà del volume del sistema di reazione (per esempio, se il sistema di reazione è 20μl, soluzione della miscela della presa 10μl 2×RT-PCR EasyTM), aggiunge la quantità appropriata di modello del RNA e di iniettori specifici ed aggiunge ddH2O senza RNAsi per comporre il volume. Riferisca alla tabella 1 qui sotto per la preparazione specifica del sistema di reazione di RT-PCR.

Forma 1: Preparazione del sistema di RT-PCR

1*: La concentrazione finale di iniettore è solitamente 0.2-0.25μM per migliorare i risultati. Quando la prestazione della reazione è povera, la concentrazione nell'iniettore può essere regolato all'interno della gamma di 0.1-0.5μM.

Nota: L'iniettore di andata e l'iniettore inverso sono gli iniettori specifici per il gene dell'obiettivo; il sistema 50μl, si riferisce prego al sistema 20μl per regolare proporzionalmente il dosaggio del reagente.

C: Regolazione di programma di reazione di RT-PCR

• Dopo la preparazione del sistema di RT-PCR in riferimento alla tavola di cui sopra, miscela delicatamente (potete usare la punta della pipetta per soffiare delicatamente; potete anche mescolarti su un vortexer e su una centrifuga brevemente per raccogliere il liquido sparso sulla parete del tubo o sul cappuccio del tubo e su un posto sul contenitore di ghiaccio per uso successivo).

2. Riferisca alle regolazioni di programma della reazione di RT-PCR (tabella 2) per fissare la temperatura ed il tempo della reazione.

Nota: Per assicurare l'attività della miscela di 2×RT-PCR EasyTM e per migliorare la sua efficienza di amplificazione, è meglio da preparare il sistema di reazione di RT-PCR dopo la fissazione del programma dello strumento di PCR, di modo che il programma della reazione può essere seguito subito dopo che il sistema è preparato.

Forma 2: Regolazione del sistema di reazione di RT-PCR

Nota: La procedura di cui sopra è per riferimento soltanto. Gli stati reali della reazione variano secondo i termini strutturali del modello, degli iniettori, ecc. Per i modelli del RNA con le strutture secondarie complesse, la temperatura della reazione per il primo punto di trascrizione inversa è raccomandata per essere 50°C. Nell'operazione specifica, è necessario da progettare i termini ottimali della reazione, compresi la temperatura di tempera, tempo di estensione, ecc. secondo i termini specifici della dimensione del frammento dell'obiettivo, la sequenza bassa del frammento amplificato ed il contenuto di GASCROMATOGRAFIA e la lunghezza dell'iniettore.
Diagramma di operazione di RT-PCR

Trascrittasi inversa di Foregene

La trascrittasi inversa di Foregene può fornire la reazione inversa altamente efficiente e specifica della trascrizione. La trascrittasi inversa esibisce l'alta affinità ed ancora mantiene la buona attività inversa della trascrizione ad una temperatura della reazione di 50°C. Può invertire bene trascrive il RNA con la struttura secondaria complessa che altre trascrittasi inverse non possono trattare. La trascrittasi inversa di Foregene ha alta sensibilità ed è applicabile in una vasta gamma di importi del RNA (0.1pg≤RNA≤1μg).

DNA polimerasi di Foregene HotStar Taq

Fornisce un'amplificazione altamente specifica della PCR. Quando la trascrizione inversa è in corso, la DNA polimerasi è completamente inefficace e non ostacola la reazione inversa della trascrizione. Dopo il programma della reazione di PCR, riscaldato a 94°C, la DNA polimerasi è attivata e la trascrittasi inversa è inattivata. Il processo di avviamento a caldo elimina la formazione di iniettori e di dimeri di tempera non specifici dell'iniettore nel primo ciclo, assicurando l'alte specificità ed affidabilità dell'amplificazione di PCR.

Cautela: (Legga per favore con attenzione le precauzioni prima di usando il corredo)

- I reagenti dovrebbero evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento, altrimenti la prestazione dei reagenti diminuirà o diventerà invalida.

- È raccomandato per usare l'estrazione del campione o il RNA fresca del modello immagazzinato a -80℃ (RNA dovrebbe evitare il congelamento ripetuto e lo scioglimento).

- Per evitare la contaminazione della RNAsi, l'operazione di esperimento dovrebbe essere realizzata nello spazio senza RNAsi; le punte della pipetta ed i tubi di PCR utilizzati devono essere senza RNAsi; ed i guanti eliminabili e le maschere dovrebbero essere indossati.

- Questo corredo deve essere usato con gli iniettori specifici per gli esperimenti. Selezioni prego gli iniettori specifici affinchè il gene siano amplificati secondo i bisogni dell'esperimento.

- Prima dell'uso, metta la miscela di 2× RT-PCR EasyTM su ghiaccio completamente alla colata, al colpo di frusta ed alla miscela molto prima di uso; la preparazione del sistema dovrebbe essere azionata su un bagno di ghiaccio per migliorare la prestazione del corredo e la specificità dell'amplificazione di PCR.

- Bagno di ghiaccio

reagenti Auto-pronti

- Modello del RNA

- Iniettori specifici di PCR del gene

Sicurezza

       - Questo prodotto è per uso di ricerca scientifica soltanto, prego non lo utilizza nella medicina, nella medicina clinica, in alimento ed in cosmetici.

       - Vestiti del laboratorio di usura, guanti, vetri di protezione, ecc. adatti quando usando i prodotti chimici.

Il controllo negativo ha valore troppo alto della fluorescenza

1. Contaminazione del reagente causata durante il funzionamento.

Raccomandazione: Sostituisca con i nuovi reagenti per gli esperimenti di RT-PCR.

2. La contaminazione si è presentata durante la preparazione del sistema di reazione di PCR. Raccomandazione: Appronti i provvedimenti cautelari necessari durante il funzionamento, come: guanti d'uso del lattice, facendo uso di una punta della pipetta con un filtro, ecc.

3. Gli iniettori sono degradati e la degradazione degli iniettori condurrà all'amplificazione non specifica.

Suggerimento: Usi l'elettroforesi di SDS-PAGE per individuare se gli iniettori sono degradati e sostituiscali con i nuovi iniettori per gli esperimenti di RT-PCR.

Ripetibilità difficile dei valori quantitativi

1. Lo strumento sta funzionando male.

Suggerimento: Ci possono essere errori fra ogni foro di PCR della macchina di PCR, con conseguente riproducibilità difficile durante la gestione o la rilevazione della temperatura.

Effettui prego la prova secondo le istruzioni dello strumento corrispondente.

2. La purezza del campione non è buona.

Raccomandazione: I campioni impuri condurranno alla riproducibilità difficile dell'esperimento, che comprende la purezza del modello e degli iniettori. È meglio da repurify il modello e gli iniettori sono purificati il più bene da SDS-PAGE.

3. Il tempo della preparazione e di immagazzinamento del sistema di PCR è troppo lungo.

Suggerimento: Usi il sistema di RT-PCR per gli esperimenti di PCR subito dopo della preparazione e nonlo lasci per troppo tempo; è raccomandato per installare il programma di PCR prima del procedimento con la preparazione del sistema di RT-PCR.

4. Gli stati di amplificazione di PCR non sono adatti e la sequenza o la concentrazione dell'iniettore è impropria.

Suggerimento: confermi la precisione della sequenza dell'iniettore e l'iniettore non è stato degradato; quando il segnale di amplificazione non è buono, provi a regolare la temperatura di tempera ed a regolare giustamente la concentrazione nell'iniettore.