Corredi inversi veloci ed altamente sensibili RT II FACILE della trascrizione del reagente di laboratorio per la generazione del cDNA del primo filo
Applicazione del corredo
Direttamente usato per analisi quantitativa in tempo reale di PCR di espressione genica.
Può analizzare rapidamente ed esattamente le tracce di RNA quali i virus a RNA.
Trascrizione inversa dei modelli del RNA con l'alta struttura secondaria contenta o complessa di GASCROMATOGRAFIA.
Kit Component Information
2×RT o-EasyTM miscela: Trascrittasi inversa di Foregene, inibitore della RNAsi, dNTPs, stabilizzatore, rinforzatore, ottimizzatore ed iniettore inverso della trascrizione (iniettore casuale, (distacco) iniettore oligo 18) con il rapporto ottimizzato.
Tolleranza della miscela di RT
Il 2×RT o-EasyTM la miscela ha mostrato una tolleranza molto alta ai sali della guanidina e dell'alcool dopo avere verificato l'analisi. Il RNA purificato in laboratorio ha spesso residui di sali della guanidina e dell'alcool, che hanno un forte effetto inibitorio su trascrizione inversa, con conseguente effetto inverso insoddisfacente della trascrizione o efficienza inversa bassa della trascrizione. La tolleranza dei prodotti facili di serie di Foregene RT ai sali della guanidina e dell'alcool rende la trascrizione inversa più facile e più efficiente.
Analisi di tolleranza dell'alcool
Analisi di tolleranza del sale della guanidina
Preparazione prima dell'operazione
È raccomandato vivamente che gli utenti leggano con attenzione le istruzioni prima di usando questo corredo. I corredi facili di serie di RT sono facili da operare, convenienti e veloci e le istruzioni forniscono l'uso corretto di intero corredo. Prepari prego i materiali e le attrezzature sperimentali necessari prima dell'uso.
Importo del RNA del modello
Il RNA del modello dovrebbe essere estratto preferibilmente dai campioni freschi o essere immagazzinato a -80°C (ha ripetuto il congelamento e lo scioglimento del RNA dovrebbe essere evitato).
RT EasyTM II: (RNA di totale 0.1pg-0.5μg o sistema)/10μl di 0.01pg-0.05μg mRNA.
Amplificazione non specifica
1. Progettazione irragionevole dell'iniettore.
Raccomandazione: Iniettori di progettazione secondo i principi di progettazione dell'iniettore.
2. Residui genomica.
Raccomandazioni: Usi un corredo inverso della trascrizione come (gatto. No. RH-01031) che contiene gli iniettori dell'trans-introne di ablazione o di progettazione del genoma.
RT-QPCR nessun segnale di amplificazione
1. Il RNA è degradato.
Raccomandazione: Il materiale per l'estrazione del RNA dovrebbe essere fresco come possibile ed il RNA di alta qualità e di grande purezza dovrebbe essere usato.
2. Il RNA contiene gli inibitori.
Raccomandazione: Gli inibitori inversi della trascrizione includono generalmente lo SDS, i sali della guanidina, gli ED, ecc. È raccomandato per lavare il precipitato del RNA con l'etanolo di 70% per rimuovere gli inibitori.
3. Edizioni di progettazione dell'iniettore.
Raccomandazione: Secondo il principio di progettazione dell'iniettore, riprogetti gli iniettori per ispezione.
La banda dell'obiettivo compare nel controllo in bianco
1. Contaminazione degli strumenti o dei reagenti di funzionamento.
Raccomandazione: Tutti i reagenti o attrezzature per l'esperimento dovrebbero essere sterilizzati nell'autoclave. Sia attento e delicato impedire i campioni del DNA essere trascinatoe la pipetta o si è rovesciato dal tubo centrifugo.
2. La contaminazione si è presentata durante la preparazione del sistema di reazione di PCR.
Raccomandazione: Prenda le precauzioni necessarie quando trattano, per esempio: Guanti del lattice di usura, punte di filtro da uso. Utilizzi la miscela in tempo reale di PCR in un sistema a prova di contaminazione.
3. Gli iniettori sono degradati.
Raccomandazione: Usi l'elettroforesi di SDS-PAGE per individuare se gli iniettori sono degradati e sostituisca con i nuovi iniettori per gli esperimenti di rilevazione della fluorescenza.
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